Test-Kit Real Time For Human-Serum-Verletzungs-Exsudat-Proben Monkeypox-Virus PCR schnelle

Spezifikation

VERFAHREN

1. Probenaufbereitungen
DNA-Extraktion von den klinischen Proben wird entsprechend den entsprechenden Anforderungen und den Verfahren in der Virus DNA-Extraktionsausrüstung geleitet. Extrahiert

DNA kann für Entdeckung direkt benutzt werden. Wenn die Probe nicht sofort nach Extraktion ermittelt wird, sollte sie an -70°C für Bereitschaft gespeichert werden und wiederholte Frieren-Tauenzyklen vermeiden.

2. Reaktionssystemvorbereitung
(1) Systemvorbereitung: Nehmen Sie das Reagens von der Ausrüstung, heraus und lassen Sie es vollständig bei Zimmertemperatur auftauen. Wandeln Sie die Mischung und die Zentrifuge sofort um. N-Testreaktionen (N = Zahl von den geprüft zu werden Proben + positive Steuerung + negative Steuerung + 1) werden für Reaktionssysteme beziehungsweise wie folgt vorbereitet.

(2) ReaktionsSystemverteilung: Mischen Sie gut den oben genannten Reaktionspuffer, Zentrifuge, und führen Sie 15μL von Aliquoten in PCR-Rohre zu, die für Leuchtstoffpcr-Instrument passend sind. (Zentrifugieren Sie die PCR-Rohre an 6,000rpm, damit 30s und Transport Behandlungszone. probiert)

3. Beispielladen (Beispielbehandlungszone)
Fügen Sie Probe der Nukleinsäure 10μL, negative Steuerung und positive Steuerung den oben genannten PCR-Rohren beziehungsweise hinzu. Bedecken Sie die Rohre fest und Zentrifuge an 6,000rpm für 10s und dann Transport zur PCR-Verstärkungszone mit einer Kappe.
* Vorkehrung: Proben im folgenden Auftrag hinzuzufügen ist
empfahl sich: negative control-> Nukleinsäureprobe - > positive Steuerung.
 

4. Pcr-Verstärkung (PCR-Verstärkungszone)
4,1 setzen Sie die caped PCR-Rohre in Realzeit-PCR-Maschine für Verstärkung.
4,2 Fluoreszenz PCR-Zykluszustandseinstellung

Sammeln Sie Leuchtstoffsignale an Schritt3:60 ℃; 35s für ABI 7500, 20s für SLAN-96S/96P, während 13s für andere Realzeit-PCR-Systeme. Das Gesamtvolumen: 25μL.

4,3 Beseitigung nach Entdeckung
Schaffen Sie die PCR-Rohre in einer Siegeltasche nach Reaktion ab und behandeln Sie die benutzten Rohre als medizinische Abfälle.
 

5. Einstellungen für Ergebnisanalyse
Stellen Sie die Grundlinie an einer Region vor der exponentialen Verstärkung ein, in der die Leuchtstoffsignale aller Proben verhältnismäßig stabil sind (keine bedeutenden Schwankungen in allen Proben); stellen Sie den Ausgangspunkt (Zykluszahl) weg von den Signalschwankungen am Beginnen ein
Phase der Fluoreszenzsammlung; stellen Sie den Endpunkt (Zykluszahl) 1~3 Zyklen vor dem Ct der ersten Probe ein, um exponentiale Verstärkung einzutragen. 4~15 Zyklen werden empfohlen.
Stellen Sie das Schwellenrecht über dem Höhepunkt der negativen Steuerverstärkungskurve ein (unregelmäßige Geräuschkurve).
 

6. Qualitätskontrollkriterien
Vor der Bewertung der Exemplarergebnisse, sollten die positive Steuerung und die negative Steuerung unter Verwendung der Interpretationstabelle unten interpretiert werden, und die positive Steuerung und negative die Steuerkurve müssen richtig durchgeführt werden, andernfalls ist- das Beispielergebnis ungültig.

7. Interpretation von Testergebnissen
FAM-Kanäle für Monkeypox-Virus, Entdeckungsergebnis sollten als unten interpretiert werden.
A), Positiv: Ct-≤ 38 und Verstärkungskurve ist S-förmig.
B) vermutete: 38 < Ct=""> 40 oder ungültiges Ct- und Ct-≤ 35 in VIC-Kanal für den zweiten Test.
c), Negativ: Ct > 40 oder ungültiges Ct- und Ct-≤ 35 in VIC-Kanal.
d), erneuter Test: Ct > 40 oder ungültiger Ct und Ct > 35 in VIC-Kanal.